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Thp-1細胞高效率轉(zhuǎn)染條件分享

轉(zhuǎn)染材料準備：

1、轉(zhuǎn)染試劑用量：10ul

2、siRNA濃度：20um/L

3、細胞密度：1*106-1*105

4、轉(zhuǎn)染用培養(yǎng)板：6孔板

5、轉(zhuǎn)染試劑：Advanced DNA RNA轉(zhuǎn)染試劑；貨號：AD600025

6、轉(zhuǎn)染時間：48小時

7、細胞培養(yǎng)胎牛血清：Z7180FBS-500超低內(nèi)毒素胎牛血清

8、細胞凍存液：L0100無血清細胞凍存液
注意：本細胞轉(zhuǎn)染用量條件不適合lipo使用。

操作過程：

1.提前1天接種細胞：細胞匯合度在60-80%左右，再進行轉(zhuǎn)染。

2. 核酸復合物制備：將核酸與轉(zhuǎn)染試劑按照比例關(guān)系直接混合，用移液器吹打、混勻，室溫靜止15分鐘。

3.在細胞培養(yǎng)基中加入核酸復合物：根據(jù)參考用量在細胞中加入核酸復合物，并輕輕混勻；細胞培養(yǎng)基里面可以含有血清。

4.細胞換液：轉(zhuǎn)染24小時后對細胞進行正常換液，懸浮細胞轉(zhuǎn)染過程中不用換液。

5.分析結(jié)果：質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染48-72小時后熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-96小時檢測mRNA或蛋白表達。若進行穩(wěn)定表達細胞株的篩選，則在轉(zhuǎn)染后24-48小時左右加入適量的藥物進行篩選。siRNA轉(zhuǎn)染后9小時熒光檢測轉(zhuǎn)染效率，48-72小時檢測mRNA或蛋白表達。

二、轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)品介紹

Zeta Life 公司與美國加利福尼亞大學舊金山校區(qū)聯(lián)合開發(fā)用于哺乳動物細胞、活體動物轉(zhuǎn)染的 Advanced DNA RNA 第三代多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑，此技術(shù)成為新的全球蛋白功能、免疫細胞及干細胞治療、研發(fā)及生產(chǎn)的主要關(guān)鍵技術(shù)之一。

三、優(yōu)秀表現(xiàn)

Zeta Life多肽小分子轉(zhuǎn)染試劑尺寸大小是傳統(tǒng)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑體積的1/10;

本轉(zhuǎn)染試劑是通過細胞內(nèi)?和細胞主動吸收進入細胞；

本轉(zhuǎn)染試劑進入后對細胞膜無物理性損傷，不易出現(xiàn)細胞變形，保持高的細胞活力；

不激活細胞表面或細胞體內(nèi)marker;

可反映真實的細胞通路蛋白原始數(shù)據(jù)；

可轉(zhuǎn)染免疫細胞、懸浮細胞等；